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Index & Contents

분자생물학 자료 Agarose gel 전기영동 Report

 

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[목차]

 

❑ Agarose gel 전기영동시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들

A. Agarose gel 전기영동

❑ 실험방법

B. Agarose gel에서 DNA의 용출

    1) gene Clean Ⅲ kit를 이용한 추출

❑ 실험방법

    2) QIAquick kit를 이용한 추출

❑ 실험방법

 

 

 

• 낮은 전압에서 선형으로 된 DNA 조각의 이동속도는 부하되는 전압에 비례한다. 그러나 전기장에서 전류의 흐름이 커짐에 따라 높은 분자량을 가진 DNA 조각의 이동속도는 빨라지게 되므로 전압이 올라감에 따라 agarose gel에서 DNA 분리 효과가 감소된다. 2 kb보다 큰 DNA 조각들의 분리를 최대로 하기 위해서는 agarose gel에 5 V/㎝ 이상의 전압을 부하시켜서는 안된다.

 

A. Agarose gel 전기영동

 

❑ 실험방법

① 깨끗하고 건조한 유리판(또는 전기영동 기구에 꼭 맞게 만들어진 플라스틱판) 사방 모서리를 주형의 모양이 되도록 테이프로 감은 후 수평으로 맞추어진 판 위에 주형을 둔다.

• 테이프로 감을 필요가 없는 기구가 요즈음 많이 시판되고 있다.

② 전기영동 tank를 채우고 gel 제조에 이용하기 위한 전기영동 완충용액(1× TAE)을 충분히 준비한다. 다음 표를 이용하여 분리하고자 하는 DNA 크기에 해당하는 양의 agarose 분말과 완충액을 삼각 플라스크 또는 유리병에 담는다.

• 1× TAE 용액은 먼저 50× 용액을 제조한 다음 희석해서 쓴다. 50× TAE 1 liter를 제조하기 위해서는 Tris 242g, glacial acetic 57.1㎖, 0.5M EDTA, pH 8.0 100㎖를 녹여 증류수로 1 liter까지 채운다.

• 전기영동 tank와 gel은 동일한 전기영동 완충액을 사용해야 한다. 이온강도 또는 pH에 약간의 차이만 있어도 DNA 조각의 이동속도에 크게 영향을 주기 때문이다.

③ Microwave oven를 이용하여 agarose가 녹을 때까지 서서히 가열한다.

④ 용액을 60℃까지 식힌다. 필요하면 ethidium bromide를 최종농도 0.5㎍/㎖이 되도록 가하고 잘 혼합한다.

 

 

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