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액체크로마토그래피 실험
( HPLC에 의한 카페인 분석 실험 )

ABSTRACT
화학에서 혼합물을 이루는 여러 물질을 알아낼 때는 많은 방법을 사용한다. 그 중 크로마토그래피는 다양한 분야에서 널리 활용되고 있는 유용한 도구이다. 이번 실험에서는 고성능 액체 크로마토그래피(High Performance Liquid Chromatography; HPLC)를 이용하여 adenine과 caffeine의 retention time과 그들의 구조와의 관계를 살펴보고 각각의 흡수 스펙트럼을 조사해 각 물질이 잘 흡수하는 파장을 알아본다. 그리고 두 표준용액의 크로마토그램에서 얻는 표준곡선을 이용해 커피한잔에 들어있는 caffeine의 양을 추정해보도록 한다.

INTRODUCTION
배경 이론
1. 크로마토그래피
‘크로마토그래피는 현대화학의 강력한 분석기법 중 하나로, 이 분석법은 여러 성분이 혼합되어 있는 각종 시료를 성분 별로 분리하고 각 성분의 확인과 정량을 동시에 할 수 있는 전 분석법이다. 이는 여러 가지 종류가 있는데 특히 이동상 혹은 정지상에 따라 크게 분류할 수 있으며 HPLC는 액체를 이동상으로 하는 크로마토그래피이다.’1)
‘HPLC에서도 역상 크로마토그래피(Reversed phase Chromatography; RPC)란 비극성의 고정상과 극성의 이동상을 사용하는 것을 총칭하는 말로, 오늘날 가장 빈번하게 사용되는 일반적인 HPLC의 기법이다. 이상적으로 이는 비극성 내지는 약한 극성의 화합물 분리에 적합한 방법이다 특히 이것은 사용하기 쉽고 효율이 좋으며 컬럼의 안정성이 높은 등의 특징에 더하여 유사 화합물 및 각기 다른 화합물의 동시분석이 가능하다’2) 는 장점이 있다. 특히 ‘RPC에서는 정지상이 탄화수소 류와 같은 비극성이며, 이동상으로는 물, 메탄올 또는 아세토니트릴과 같은 비교적 극성이 큰 용매를 사용한다. 이에, 극성이 가장 큰 성분은 먼저 용리하고, 극성이 가장 작은 분석물을 가장 나중에 용리한다. 특히 이번 실험에서는 octyldecyl siloxane 결정상을 충전물로 사용한다. 이것의 긴 사슬 탄화수소기는 서로 나란히 같은 방향으로, 그리고 입자의 표면에 수직으로 배열되어 솔과 같은 비극성 탄화수로 표면을 제공하게 된다.’3) 즉 이는 혼합물이 비극성 물질과 더 상화작용하게 된다.
2. 분자흡수분광법
‘분자시료는 각각 전자기 복사선 중 어떤 특정파장을 흡수할 수 있다. 이 과정에서 복사선의 에너지는 잠깐 동안 분자에 옮겨가고 그…(생략)
 

        
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